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氨基酸分析儀的介紹和基本原理、應(yīng)用

來源：時間：2022-12-05 10:35:25 瀏覽：3050次

用來進行蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的測定的儀器，稱為氨基酸分析儀。必須先蛋白質(zhì)及肽水解成單個氨基酸，然后再進行氨基酸分析。其是以陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測定為基準(zhǔn)的離子交換色譜儀。
和普通HPLC相比較，儀器有著相似的基本結(jié)構(gòu)。然而針對氨基酸分析進行了如氮氣保護、惰性管路、在線脫氣、洗脫梯度及柱溫梯度控制等細(xì)節(jié)優(yōu)化。

簡介

基本原理

氨基酸混合物在流動相（緩沖溶液）的推動下從裝有陽離子交換樹脂的色譜柱流經(jīng)流經(jīng)，各氨基酸與樹脂中的交換基團交換離子。當(dāng)洗脫時使用的pH緩沖溶液不同時，氨基酸混合物由于不同的交換能力而分離，分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑發(fā)生反應(yīng)，生成紫色化合物或黃色化合物，其在570nm、440rnn的吸光度用可見光檢測器進行檢測。這些有色產(chǎn)物對應(yīng)的吸收強度與洗脫出來的各氨基酸濃度之間的關(guān)系和朗伯-比爾定律相符合。以此為依據(jù)可以定性、定量分析氨基酸各組分氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測。此檢測方法不需要柱前或柱后衍生待測氨基酸。

系統(tǒng)

一般細(xì)分為蛋白水解分析系統(tǒng)（鈉鹽系統(tǒng)）和游離氨基酸分析系統(tǒng)（鋰鹽系統(tǒng)）兩種系統(tǒng)。梯度洗脫利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰來進行。在這當(dāng)中，鈉鹽系統(tǒng)每次分析的氨基酸至多能夠達(dá)到大約25種。有比較快的速度以及比較好的基線平直度；鋰鹽系統(tǒng)每次分析的氨基酸至多能夠達(dá)到大約50種，然而和鈉鹽系統(tǒng)相比，速度比較慢，也沒有較好的基線平直度。

效果

相比較于目前已知的氨基酸分析方法，和HPLC柱前衍生方法相比較，除了靈敏度（Zdi檢測限）稍低以外，在如分離度、重現(xiàn)性、操作簡便性、運行成本等其他方面，都比其他分析方法要好。

特點

1、高靈敏度:

按照蛋白水解液標(biāo)準(zhǔn)作為例子，能夠檢測到3pmoL。

2、快速、高分辨率:

水解氨基酸僅需半個小時的分析時間，生理體液僅需110分鐘。

3.柱后衍生技術(shù)：

和氨基酸反應(yīng)之前才混合兩種反應(yīng)液，使反應(yīng)液的使用期限得到了有效的延長，并且不需要額外的制冷裝置存放。

4、氨氣排除系統(tǒng):

除氨柱増加了，能夠?qū)痹诜治鲞^程中對基線及峰形的干擾很好地進行排除。

應(yīng)用