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如何在流式細(xì)胞儀上機(jī)前準(zhǔn)備好你的樣品？

來源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-11-11 14:50:57 瀏覽：2119次

樣品的制備是進(jìn)行流式細(xì)胞分析術(shù)的關(guān)鍵。流式細(xì)胞儀上機(jī)前樣品的制備有以下幾點(diǎn)：

流式細(xì)胞儀

1、細(xì)胞需懸浮于培養(yǎng)基或PBS中（含1%的血清或0.5%的BSA）；上機(jī)前需用200目篩網(wǎng)過濾細(xì)胞，為了避免細(xì)胞粘連，可以添加1mmol/LEDTA。

2、如果分選后的細(xì)胞用于繼續(xù)培養(yǎng)，需確保樣本無菌，可適量添加抗生素。

3、推薦樣品體積為200-500μL。用于分析的樣品推薦濃度為0.5-5×106cells/mL，用于分選的樣本推薦濃度為106-107cells/mL。為提高分選的速率，可以先準(zhǔn)備盡量濃的樣本（大于107cells/mL），上機(jī)后根據(jù)分選效率再用培養(yǎng)基或緩沖液稀釋成合適的濃度。

二、分選需準(zhǔn)備的材料：

1、接收細(xì)胞的液體：完全培養(yǎng)基、血清、適合細(xì)胞存活的自制緩沖液、裂解液。

2、接收的容器：1.5mL Eppendorf管（至少加入100μL液體）、5ml BD Falcon 352054流式管（至少加入1mL液體）、15mL離心管（至少加入2 mL液體）、96孔培養(yǎng)板（加入100μL培養(yǎng)基）、PCR管（板）（加入4-10μL預(yù)擴(kuò)增液）。

3、每次上機(jī)需要準(zhǔn)備空白對(duì)照（未染色的樣本）、同型對(duì)照和每一種熒光通道的單染樣品來調(diào)節(jié)電壓和補(bǔ)償（在其他儀器上獲取的電壓值和補(bǔ)償值不通用）；為了圈門精確及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，用戶可以準(zhǔn)備FMO對(duì)照和陽性對(duì)照。

4、用戶可以在分析（選）前把其他儀器上的流式圖發(fā)給工作人員，為分析（選）做更充分的準(zhǔn)備。

5、使用96孔PCR板接收單細(xì)胞的用戶需要攜帶未使用的96孔PCR板及透明的封板膜。

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