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    項(xiàng)目介紹

    生物透射電鏡介紹:透射電鏡,即透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱 TEM),是一種最高分辨率可達(dá)到0.1-0.2納米的顯微鏡,是觀察和研究超微結(jié)構(gòu)的重要工具。在生物科學(xué)研究方面,透射電鏡可用來觀察細(xì)胞整體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),包括(植物)細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核和各種細(xì)胞器的變化、外源物質(zhì)(如病原微生物、各種納米顆粒)與細(xì)胞的關(guān)系,如外源物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的方式、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況、細(xì)胞對(duì)外界刺激的反應(yīng)(包括自噬、凋亡、壞死等)。

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    前處理方法:

    您需要提供的樣品:收集細(xì)胞/組織取樣(新鮮迅速取材),置于1.5ml尖底離心管內(nèi),加入預(yù)冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛固定液(固定液加到?離心管,使樣品完全浸沒在固定液中),放置于4℃過夜,請(qǐng)不要倒棄固定液,一般固定12h或過夜后可寄送。

    具體取材及固定方法如下:

    1.對(duì)于細(xì)胞類,106以上的細(xì)胞,用新鮮的培養(yǎng)液興奮細(xì)胞,用細(xì)胞刮刀刮下來或者酶消化,加入預(yù)冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小時(shí),1500-3000轉(zhuǎn)離心,5-10min,收集細(xì)胞于管底肉眼可見黃豆或者綠豆粒大小,棄上清,沿管壁緩慢加入4℃新的固定液,然后放入4°C冰箱過夜。

    2.對(duì)于組織類,新鮮取材,取材位置準(zhǔn)確,組織大小盡量在1-2mm3(長1-5mm×寬1mm×高1mm),離體取材后請(qǐng)盡快投入4℃預(yù)冷的固定液中,然后放入4°C冰箱固定過夜。

    3.對(duì)于細(xì)菌類,吸取OD0.5-0.8的培養(yǎng)物,加入預(yù)冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小時(shí),3000-5000轉(zhuǎn)離心,5-10min,離心后棄上清,收集菌體沉淀于管底黃豆大小,可以用預(yù)冷的pH7.2的PB洗1-2次,棄上清,沿管壁緩慢加入新的4℃預(yù)冷的固定液,然后放入4°C冰箱過夜。

    樣本編號(hào)建議按照字母或數(shù)字來,標(biāo)記清晰,樣本量充足。

    *固定液的量請(qǐng)參考上圖,加至箭頭所示位置,細(xì)胞、細(xì)菌、真菌樣品用尖底離心管

    *如為其他特殊樣品,需要特殊的固定方式和前處理方式,請(qǐng)與工作人員溝通確認(rèn)。

    樣品要求

    1.不需要稀釋的液體樣品需要準(zhǔn)備0.3毫升以上,最好1毫升,用2毫升左右ep管裝并封口膠封好口;注明樣品成分和類型,預(yù)期形貌和尺寸;一般會(huì)拍攝10張左右的照片;

    2.默認(rèn)染色制樣方式:取10微升液體滴銅網(wǎng),用1%磷鎢酸(或飽和醋酸鈾)染色制樣并清洗,室溫干燥制樣后放置一個(gè)小時(shí)以上;細(xì)菌、真菌、病毒、外泌體、細(xì)胞、脂類、膠束、蛋白默認(rèn)吸附5到10分鐘,染色1分鐘,不超聲也不稀釋;超聲可能會(huì)改變樣品的形態(tài),樣品濃度很難用肉眼判斷,若需要超聲和稀釋,請(qǐng)訂單中明確;

    3.染色制樣結(jié)果受樣品純度和濃度的影響較大,若樣品中含有較多的有機(jī)鹽和雜質(zhì),染色效果一般較差;

    4.病毒、外泌體需要濃縮,50微升以上;

    5.該項(xiàng)目不支持回收,請(qǐng)自行留樣;

    6.一般送樣方式為4℃冷藏,冷凍送樣需要在訂單中特別指明(比如外泌體和病毒樣品);上門取樣樣品,樣品如需冷藏,請(qǐng)一定準(zhǔn)備冰塊或干冰和泡沫箱;

    7. 細(xì)菌和病毒等需要滅活處理,有傳染性的樣品不做測試;

    8. 注明圖片標(biāo)尺和對(duì)應(yīng)的圖片張數(shù),數(shù)量不超過10張。如未注明,不接受因標(biāo)尺問題導(dǎo)致的免費(fèi)補(bǔ)拍或重拍(標(biāo)尺100nm是儀器的極限,通常拍出的樣品分辨率低,不建議選擇該標(biāo)尺)。我們盡量會(huì)找您預(yù)期的圖片形貌,但是最終以實(shí)際形貌為準(zhǔn)。

    項(xiàng)目案列

    常見問題

    低壓的范圍是?

    80-120kv

    哪些樣品一般需要負(fù)染?

    觀察形貌的生物和有機(jī)類,如細(xì)菌、病毒、膠束等。

    染色劑有哪些?

    磷鎢酸、醋酸鈾。

    低壓可以拍高分辨嗎?

    不能,因?yàn)殡妷旱?,能量小,分辨率達(dá)不到要求。

    送樣方式?

    易變質(zhì)的需要低溫冷藏,病毒、外泌體需要濃縮并冷凍。

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