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    項(xiàng)目介紹

    細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種,檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況,即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響,來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗腫瘤藥效測(cè)定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)。

    操作流程:

    (1)收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3x104  ~5x104 個(gè)/mL;

    (2)96孔加入細(xì)胞懸液,100ul/孔,邊緣用pbs填充,5%CO2 、37℃孵育;

    (3)培養(yǎng)24h后給藥,設(shè)置3~6個(gè)復(fù)孔,5%CO2 、37℃孵育;

    (4)孵育適當(dāng)時(shí)間后,棄舊液,用無(wú)血清培養(yǎng)基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無(wú)血清培養(yǎng)基與MTT按照9:1稀釋,200ul/孔,繼續(xù)培養(yǎng)至所需時(shí)間點(diǎn);

    (5)CCK8: 時(shí)間到后,酶標(biāo)儀450nm/處測(cè)量各孔的吸光值。

    客戶提供:

    (1)足量樣品、樣品信息(如細(xì)胞類型、分子量、溶解性、穩(wěn)定性、保存條件等);
    (2)相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容(如樣品作用時(shí)間、濃度等、細(xì)胞株等)。

    樣品要求

    1.待測(cè)樣品(濃度用戶指定)、實(shí)驗(yàn)方案、相關(guān)細(xì)胞、試劑盒及生物耗材等,平臺(tái)可有償提供。

    項(xiàng)目案列

    常見(jiàn)問(wèn)題

    MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性原理

    在活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臢化合物,用二甲基亞砜(DMSO)將其溶解成溶液,用酶標(biāo)儀測(cè)定其濃度(OD490或者570),從而定量測(cè)定細(xì)胞的存活比例,細(xì)胞增殖越多越快,對(duì)應(yīng)的吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,對(duì)應(yīng)的吸光度越低。

    CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活性原理

    CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗(yàn)明正身。在脫氫酶作用下,WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在OD 450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

    相較于MTT法,CCK8試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些?

    1.使用方便,省去了洗滌細(xì)胞,不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑;

    2.CCK-8法能快速檢測(cè);

    3.CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高,甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度;

    4.CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT 法;

    5. CCK8適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞;如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO,建議選用CCK8法檢測(cè)。

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