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    石蠟切片技術(shù)里常用的染色法——HE染色
    來源: 時(shí)間:2024-11-07 10:14:41 瀏覽:546次

    石蠟切片技術(shù)里常用的染色法——HE染色

     

    石蠟切片技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于病理學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的制片技術(shù),通過對生物組織進(jìn)行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、貼片、烤片等一系列處理,制備出可供顯微鏡觀察的薄切片;在石蠟切片的觀察中,染色是至關(guān)重要的一步,它可以使組織結(jié)構(gòu)更加清晰,便于研究人員進(jìn)行觀察和分析;HE染色,即蘇木精-伊紅染色,是石蠟切片技術(shù)中最常用的染色方法之一。

    一、原理

    HE染色利用蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)兩種染料的親和力不同,對細(xì)胞的不同成分進(jìn)行著色;蘇木精是一種堿性染料,能夠與細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)(如核酸)結(jié)合,使細(xì)胞核呈藍(lán)色或紫色;伊紅是一種酸性染料,能夠與細(xì)胞質(zhì)中的堿性物質(zhì)(如蛋白質(zhì))結(jié)合,使細(xì)胞質(zhì)呈紅色或粉紅色。

    二、步驟

    1.脫蠟:將石蠟切片放入二甲苯中,去除切片上的石蠟,使其透明。

    2.梯度酒精脫水:將脫蠟后的切片依次放入高濃度到低濃度的酒精中,以去除二甲苯,使切片適應(yīng)水環(huán)境。

    3.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除殘留的酒精。

    4.蘇木精染色:將切片放入蘇木精染液中,通常在室溫下染色5-10分鐘。

    5.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除多余的蘇木精染液。

    6.分化:將切片放入1%的鹽酸酒精中分化,直至細(xì)胞核顏色清晰,背景幾乎無色。

    7.水洗:再次用蒸餾水清洗切片,停止分化。

    8.返藍(lán):將切片放入弱堿性溶液中(如碳酸鋰溶液),使細(xì)胞核顏色更加鮮艷。

    9.伊紅染色:將切片放入伊紅染液中,通常染色1-3分鐘。

    10.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除多余的伊紅染液。

    11.梯度酒精脫水:將切片依次放入低濃度到高濃度的酒精中,去除水分。

    12.透明:將脫水后的切片放入二甲苯中,使其透明。

    13.封片:用中性樹膠或加拿大樹膠封片,覆蓋玻片。

    三、注意事項(xiàng)

    1.染液濃度和染色時(shí)間:染液濃度和染色時(shí)間需要根據(jù)組織類型和切片厚度進(jìn)行調(diào)整,以達(dá)到最佳染色效果。

    2.分化時(shí)間:分化時(shí)間不宜過長,以免過度分化導(dǎo)致細(xì)胞核顏色過淡或消失。

    3.返藍(lán)時(shí)間:返藍(lán)時(shí)間不宜過長,以免細(xì)胞質(zhì)著色受到影響。

    4.切片脫水:在梯度酒精脫水過程中,應(yīng)確保切片完全脫水,以免影響透明和封片。

    5.封片:封片時(shí),應(yīng)避免氣泡的產(chǎn)生,確保切片與蓋玻片之間無空氣。

    四、應(yīng)用

    HE染色因其簡單、快速、結(jié)果可靠等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于病理學(xué)診斷、生物學(xué)研究等領(lǐng)域通過HE染色,可以清晰地觀察到細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu),對于判斷組織的正常與否、病變性質(zhì)和程度具有重要意義。

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    文字是人類用符號(hào)記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
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